产品货号：
MT015820
中文名称：
非洲猪瘟病毒LAMP检测试剂盒(TaqMan荧光探针法)
英文名称：
ASFV Dual TaqMan LAMP Kit
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒采用TaqMan-LAMP法，配合特异性的双标荧光探针进行非洲猪瘟病毒（ASFV）检测。试剂盒采用两重设计，靶标基因P72和猪内参β-actin基因。
P72基因靶标序列：
TTTGTGCCGGGTACAATGGGTCTTCCAAAAGGATCTACAAGCGTGTAAACGGCGCCCTCTAAG
GGTGTTTGGTTGTCCCAGTCATATCCGTTGCGAGGAAACGTTTGAAGCTGCCCATGGGCCCCC
ATCTGGGACGTGCCCTGAATCGGAGCATCCTGCCAGGAtGAATGACATGCACCCAATATATGA
TGGCCCACCATATCATGGAAAAAGTCTCCGTACTGGGGAATACCAAAGGTAAGCTTGTTTCCC
AAGGTGGGGGTACCCGTATGCGGGCGTACTTTA
保存：-20℃，有效期12个月。
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- 单管两重设计，使得检测数据更可靠，避免样本误差带来的假阴性。非洲猪瘟病毒的P72基因，外加猪内参β-actin基因。
- 有效灵敏度为200个病毒/拭子，极限灵敏度为50个病毒/拭子；灵敏度为单copy水平。
- 采用特异性的双标TaqMan探针，准确性100%，无假阳性。
- 全程闭管检测，30min内完成检测；在每个检测管中含有100个病毒以上的样本，10min内即可完成检测。
- 咽拭子、鼻腔拭子和肛拭子，核酸免提取。
- 匹配便携恒温荧光检测设备，可在野外、社区、家庭、工作场所，任何环境下操作。
- 操作简便、易学、易懂，无需复杂的培训工作。
P72基因靶标序列：
TTTGTGCCGGGTACAATGGGTCTTCCAAAAGGATCTACAAGCGTGTAAACGGCGCCCTCTAAG
GGTGTTTGGTTGTCCCAGTCATATCCGTTGCGAGGAAACGTTTGAAGCTGCCCATGGGCCCCC
ATCTGGGACGTGCCCTGAATCGGAGCATCCTGCCAGGAtGAATGACATGCACCCAATATATGA
TGGCCCACCATATCATGGAAAAAGTCTCCGTACTGGGGAATACCAAAGGTAAGCTTGTTTCCC
AAGGTGGGGGTACCCGTATGCGGGCGTACTTTA
| 组分 | 规格 |
| P72扩增溶液A | 0.5mL |
| P72扩增溶液B | 0.5mL |
| P72阳性标准品 | 20μL |
| 核酸快速释放剂 | 20mL |
保存：-20℃，有效期12个月。
- P72阳性标准品为DNA形式，浓度为100 copy/μl。每次阳性对照使用5μL。
- 不同批次的试剂组分，不要混用。
- 拭子样本：鼻腔拭子采集完毕后，将拭子棉签部分放入到含有0.3mL本试剂盒提供的核酸快速释放剂中，可在1.5mL EP管，或2mL病毒保存管中操作。在释放剂覆盖棉签的情况下，漩涡混合10-20s，使棉签上的病毒和猪体细胞从棉签上脱落。放置到75℃以上温度下（可用开水），加热5分钟。取5μL加热后的浸泡液即可用于后续检测。
- 血液样本：采血完毕后（不要加入抗凝剂），待血液凝固，取50μL血清到50μL核酸快速释放剂中，混合均匀。放置到75℃以上温度下（可用开水），加热5分钟。取5μL用于后续检测。
注意：不要使用抗凝剂处理的血浆样品，血浆样品中高浓度抗凝剂会抑制检测反应。 - 纯化核酸样本：同样适用于纯化的核酸样本，取5μL核酸样品即可用于检测。
- 配置反应体系
- 按下表依次加入个成分。
成分 用量 P72扩增溶液A 10μL P72扩增溶液B 10μL 待测样本 5μL P72阳性标准品(阳性对照) 5μL 核酸释放剂(阴性对照) 5μL - 反应体系配好后，混匀2～5s，并短暂离心。
- 按下表依次加入个成分。
- 设置反应程序
恒温扩增的检测可以使用标准定量PCR仪（也可使用恒温荧光设备），荧光通道选择FAM和ROX双通道。按下表设置：温度 时间 说明 65℃ 10s 65℃ 50s 收集信号，循环30次，即总反应时间为30min。
注意：本试剂盒无需热盖加热，在使用定量PCR进行检测时，可关掉PCR仪的热盖功能，以缩短检测时间。 - 结果判读
- 结果判读的成立条件：
FAM通道(非洲猪瘟) ROX通道(β-actin内参) 结果 P72阳性标准品 起峰，成典型扩增曲线 可靠 阴性对照 无信号 无信号 P72阳性标准品 无信号 试剂失效，重新检测 阴性对照 起峰，成典型扩增曲线 发生污染，重新检测 - 检测样本结果判读
FAM通道(非洲猪瘟) ROX通道(β-actin内参) 判读结果 起峰，成典型扩增曲线 阳性 无信号 起峰 阴性 无信号 无信号 采样不佳或样本保存失，重新采样和检测。 - 典型的检测结果
阳性样本(10 copies)
红色线为FAM信号，表明存在非洲猪瘟核酸分子阴性样本（5μL拭子浸泡液）
FAM无信号，ROX有信号，表明不含非洲猪瘟核酸分子
- 结果判读的成立条件：
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